Informations

Alternatives au bromure d'éthidium pour la coloration des petits acides nucléiques ?


Bien que le bromure d'éthidium fonctionne bien pour la coloration des molécules d'ARN simple brin ou d'ADN double brin plus grosses, il ne colore pas très bien les acides nucléiques plus petits. J'ai observé qu'à environ 20 bases et au-dessous, les acides nucléiques simple brin sont difficiles à voir avec la coloration EtBr à moins que les acides nucléiques ne soient très concentrés.

Quelles sont les bonnes alternatives pour observer les petits acides nucléiques dans les gels de polyacrylamide ? La principale considération serait la facilité d'utilisation, et cela devrait être possible sans aucun équipement inhabituel.


Une liste de colorants est disponible ici et une liste de colorants spécifiques aux acides nucléiques est disponible ici. Je pense que vous avez deux choix, le colorant de gel d'acide nucléique SYBR Gold (S11494) qui peut être détecté sous une lumière UV (je ne sais pas s'il peut être utilisé avec des gels de polyacrylamide). Votre autre option qui peut être utilisée avec les gels de polyacrylamide est le colorant de gel d'ARN SYBR Green II (S7564, S7568, S7586), ce colorant peut être détecté avec une lumière UV post-électrophorèse. Il indique l'ARN dans le nom, mais il peut également être utilisé pour l'ADN ss.

J'espère que cela t'aides


Je pense que GelRed ou GelGreen serait également une option. Ils prétendent être plus sensibles que l'EtBr et certainement moins toxiques (encore plus que le SYBR Green). Je ne les ai pas personnellement utilisés contre un produit aussi petit. GelRed a fondamentalement les mêmes longueurs d'onde d'excitation/émission que l'EtBr, donc aucun changement d'équipement n'est nécessaire.

Fiche produit

Lien magasin


Teintures fluorescentes en gel d'acide nucléique

Coloration d'acide nucléique qui se lie aux régions riches en A-T de l'ADN le long du petit sillon.

Invitrogen&trade SYBR&trade Green Nucleic Acid Gel Stain Starter Kit

Tout le nécessaire pour que les utilisateurs débutants utilisent les colorants en gel SYBR

Invitrogen&trade SYBR&trade Safe DNA Gel Stain dans 1X TAE

Invitrogen&trade SYBR&trade Colorant en gel d'ADN sûr dans 0,5X TBE

Développé spécifiquement pour une mutagénicité réduite et plus sûr que le bromure d'éthidium pour la coloration de l'ADN dans des gels d'agarose ou d'acrylamide

Solution de bromure d'éthidium MP Biomedicals&trade (10 mg/mL)

Solution de bromure d'éthidium (10 mg/mL), qualité biologie moléculaire

Cytiva Amersham&trade Cy&trade 3 Teinture de saturation

Exceptionnel pour l'analyse multicolore, avec des couleurs vives et facilement distinguables

Domaines d'intérêt

Événements et expositions

Des solutions d'affaires

Abonnements à la littérature et aux ampères

Service client

Suivez-nous

Fisher Scientific, Bishop Meadow Road, Loughborough, Leicestershire, LE11 5RG

© Fisher Scientific UK Ltd Tous droits réservés. Une société à responsabilité limitée constituée en Angleterre.


Explorez notre solution de recherche scientifique pour l'étude de COVID-19

Types de produits

Nous fournissons des solutions optimisées pour la recherche en sciences de la vie

La synthèse d'ADN est une technologie qui relie les acides désoxynucléiques (adénine, thymine, cytosine et guanine) pour former de l'ADN. En tant que pierre angulaire de la biologie moléculaire moderne, la synthèse d'ADN joue un rôle central dans le domaine de la biologie synthétique. En plus de la synthèse d'oligos standard, nous fournissons également des services de recherche scientifique tels que la synthèse d'oligos longs, la synthèse d'oligos phosphorothioates (S-Oligo), la synthèse d'oligos modifiés, la synthèse d'oligos fluorescents et des sondes PCR quantitatives en temps réel pour répondre à vos différents besoins.

Les peptides sont synthétisés par réaction de condensation du groupe carboxyle d'un acide aminé avec le groupe aminé d'un autre acide aminé et sont largement utilisés dans divers domaines tels que la préparation d'anticorps, le développement de médicaments et le développement de vaccins polypeptidiques. Chacun de nos polypeptides est accompagné de données HPLC et de spectrométrie de masse fiables, des rapports de synthèse détaillés sont fournis et les produits sont envoyés à l'état lyophilisé. Un personnel expérimenté peut aider les utilisateurs à concevoir des chaînes peptidiques et faire des recommandations appropriées pour différents besoins des utilisateurs, tels que des anticorps, des marqueurs spéciaux, une synthèse à grande échelle, etc. De plus, nous proposons également une synthèse PNA personnalisée de haute qualité.

Une bibliothèque de peptides est une nouvelle technique pour étudier la relation structure-fonction d'une protéine. Une banque de peptides contient un grand nombre de peptides qui ont une combinaison systématique d'acides aminés. La bibliothèque de peptides fournit un outil puissant pour la conception de médicaments, les interactions protéine-protéine et d'autres applications biochimiques et pharmaceutiques. Il a également de nombreuses applications dans le criblage de médicaments, la validation de cibles, la cartographie d'épitopes et le développement de vaccins.

La synthèse de gènes est une technologie qui synthétise des gènes par des méthodes artificielles, qui est l'un des moyens d'acquisition de gènes. Par rapport à l'acquisition de gènes à partir d'organismes existants, la synthèse de gènes n'a pas besoin de matrices et n'est donc pas limitée par la source des gènes. Nous utilisons un logiciel de conception de synthèse de gènes unique, qui comprend un ensemble complet d'outils pour concevoir des unités structurelles idéales, permettant ainsi une construction et une synthèse de gènes rapides et efficaces en une seule réaction. Ne vous limitez pas aux sites de restriction et aux polylinkers, nous synthétiserons les différentes séquences de gènes dont vous avez besoin.

La réaction en chaîne par polymérase (PCR) est une méthode largement utilisée en biologie moléculaire, qui peut reproduire rapidement des millions à des milliards d'échantillons d'ADN spécifiques, permettant aux scientifiques d'extraire seulement une petite quantité d'échantillons d'ADN pour une recherche détaillée. Nous fournissons une variété d'ADN polymérases (Taq, Bst, Pfu) et des prémélanges PCR correspondants, couvrant un large éventail de scénarios tels que la haute fidélité, la haute spécificité et l'amplification rapide. Les kits de la série Scarlet™ offrent une solution parfaite pour la PCR directe sur le sang, et le kit de génotypage PrimeSNP™ utilise la méthode PCR Competitive Allele Specific pour le génotypage d'échantillons d'ADN purifiés. Des dNTP et NTP de haute qualité (set, mix) sont également fournis.

L'acide ribonucléique (ARN), en tant que matériau clé pour la transmission de l'information génétique et la régulation cellulaire, a été largement étudié en biologie moléculaire. Comme l'ADN, l'ARN est assemblé sous forme de chaînes nucléotidiques, mais contrairement à l'ADN, l'ARN existe dans la nature sous forme de plis simple brin plutôt que de doubles brins appariés. Nous fournissons la RNasine (inhibiteur de la RNase) et la transcriptase inverse M-MLV pour fournir une solution complète de matières premières pour la recherche sur l'ARN. Les séries miAnalysis™ sont conçues pour la recherche quantitative sur les microARN. Et la série VirusMag™ est conçue pour l'isolement de l'ARN/ADN viral ou de l'ADN bactérien.

Chez SBS Genetech, nous sommes à la pointe de l'offre de solutions d'amplification isotherme basées sur notre plateforme de classe mondiale. Notre ADN/ARN polymérase Bst est au cœur de cette plateforme, qui est un mélange de polymérase Bst et de transcriptase inverse extrêmement thermostable. Sur la base de cette enzyme spéciale, nous avons développé la série de microbilles d'amplification isotherme lyophilisées PrimeIamp TM. Cette série est constituée de master mix prêts à l'emploi, qui peuvent effectuer l'amplification isotherme directement lorsque les matrices et les amorces sont ajoutées. Grâce à la technologie de lyophilisation, ces master mix sont lyophilisés en microbilles solides, qui peuvent être transportées et stockées à température ambiante avec une grande commodité.

La technologie de silençage de l'ARN est devenue un outil puissant pour étudier la fonction des gènes. Le succès de toute expérience d'ARN dépend d'un siARN de haute qualité et d'un réactif de transfection efficace. Avec la modification chimique, notre ARNsi modifié chimiquement a une stabilité beaucoup plus élevée que l'ARNsi commun. La modification chimique améliore non seulement la durée de vie du siRNA dans le sérum et la culture cellulaire, mais améliore également son activité in vitro. En ce qui concerne le réactif de transfection, notre réactif de transfection siRNA prêt à l'emploi, Sirnafectamine, peut être utilisé pour une large gamme de lignées cellulaires, avec une cytotoxicité minimale et le meilleur état cellulaire après transfection. Comme la sirnafectamine protégera l'ARN pendant tout le processus, une très faible concentration de siARN peut produire une efficacité élevée de silençage génique.

La purification des acides nucléiques est une composante importante de la biologie moléculaire et a un large éventail d'applications en médecine et en sciences biologiques. Notre kit de purification d'acide nucléique utilise une technologie de colonne de gel de silice de première classe (SiMax™ Spin Column, SiMax™ Genomic DNA Extraction, SiMax™ PCR Products/Agarose Gel Purification, SiMax™ Plasmid DNA Miniprep) et la technologie de billes magnétiques (VirusMag™ Magnetic Beads, Séparateurs magnétiques VSep™, kit d'isolation ADN/ARN en une étape VirusMag™, kit d'isolation ADN/ARN VirusMag™), qui peuvent purifier l'ADN de diverses sources de manière rapide et fiable. La pureté de l'ADN purifié par notre kit est très élevée et il convient à de nombreuses applications en aval telles que la détermination de séquence, le clonage et le clivage.

Les marqueurs d'ADN sont utilisés pour déterminer la taille approximative des molécules sur le gel pendant l'électrophorèse, sur la base du principe que le poids moléculaire est inversement proportionnel à la mobilité à travers la matrice du gel. Nous fournissons des étalons de poids moléculaire d'ADN abondants qui peuvent être utilisés pour différentes longueurs de fragments. Nos fragments de marqueurs d'ADN ont été purifiés séparément par une technologie exclusive, leur qualité est donc supérieure aux normes de l'industrie.

CRISPR (Clustré Rrégulièrement jeespacé Scourt Palindromique Repeats) est une famille de séquences d'ADN trouvées dans les génomes d'organismes procaryotes tels que les bactéries et les archées. La technologie d'édition de gènes basée sur ce système a une grande variété d'applications. Ici, nous fournissons diverses nucléases Cas, sgRNA synthétiques et T7 Endonucléase I de haute qualité pour améliorer la précision et l'efficacité de vos expériences.


GreenSafe Premium ( MB13201 )

La description: GreenSafe Premium est un nouveau colorant d'acide nucléique qui peut être utilisé comme une alternative plus sûre au bromure d'éthidium traditionnel pour détecter les acides nucléiques dans les gels d'agarose. Il est aussi sensible que le bromure d'éthidium et peut être utilisé exactement de la même manière en électrophorèse sur gel d'agarose. Le colorant GreenSafe Premium émet une fluorescence verte lorsqu'il est lié à l'ADN ou à l'ARN. Il présente deux pics d'excitation de fluorescence secondaires (≈270 nm et 290 nm) et un pic d'excitation fort à 490 nm. L'émission de fluorescence est similaire au bromure d'éthidium lorsqu'il est lié à l'ADN à 530 nm. Ainsi, le colorant GreenSafe Premium est compatible avec une grande variété d'instruments de lecture de gel.

Caractéristiques:
– Utilisé pour détecter l'ADNdb et l'ARN
– Non toxique, non mutagène et non cancérigène (c'est une alternative à la coloration au bromure d'éthidium)
– Haute sensibilité même pour les petits fragments
– Rapport signal/bruit supérieur
– Pratique prêt à l'emploi
– Compatible avec une grande variété d'instruments de lecture de gel
– Pas de déchets dangereux

Applications:
– Détection d'ADN ou d'ARN dans des gels d'agarose par pré-coloration ou post-coloration

Haute sensibilité sur une large gamme de tailles d'ADN :

Gel d'agarose à 1 % (p/v) coloré avec GreenSafe Premium

Caractéristiques:

Molécule cible : ADN et ARN
Méthode de détection : Fluorescence
Mode d'utilisation : Ajoutez de la teinture pendant la coulée du gel ou les gels peuvent être post-colorés
Disposition: Les déchets doivent être éliminés conformément aux réglementations en matière de contrôle de l'environnement
Conditions de stockage: A conserver à température ambiante ou 4°C, à l'abri de la lumière
Conditions de livraison : Expédié à température ambiante jusqu'à 4 ºC

Composants:
– 1 flacon de 1 mL

1. Pourquoi utiliser des alternatives à EtBr ?
Le bromure d'éthidium (EtBr) est probablement le colorant le plus connu utilisé pour visualiser l'ADN. En raison de sa structure chimique, il s'intercale dans les brins d'ADN formant des complexes fluorescents qui peuvent être visualisés sous lumière UV. Mais le bromure d'éthidium est un agent potentiellement cancérigène et mutagène, il doit donc être manipulé avec un soin tout particulier et nécessite généralement un espace de paillasse spécifique et exclusif afin de ne pas contaminer l'ensemble du laboratoire. En raison de tous les risques pour la santé liés au travail avec EtBr, plusieurs colorations d'ADN alternatives ont été développées au cours des dernières années. Ces alternatives sont beaucoup moins dangereuses à travailler et présentent de très bonnes performances de coloration.
NZYTech est fier d'annoncer un portefeuille de deux colorations alternatives d'acides nucléiques : GreenSafe Premium et GreenSafe Direct Load. Leur sensibilité est similaire à celle de l'EtBr et l'électrophorèse sur gel d'agarose peut être réalisée exactement de la même manière qu'avec l'EtBr.

Analyse comparative préliminaire du pouvoir de résolution de COX1 et
16S-rDNA comme marqueurs moléculaires pour l'identification des tiques du Portugal

Filipe D, Parreira R, Pereira A, Galvão N, Cristovão MJ, Nunes M, Vieira LM, Campino L, Maia, C
Parasitologie vétérinaire : études et rapports régionaux , 2021

Réponse des anticorps au virus Toscana et au virus sicilien de la fièvre des phlébotomes chez les chats naturellement exposés aux piqûres de phlébotomes au Portugal
Pereira A, Nazli A, Cristóvão JM, Vilhena H, Martins A, Cachola P, Henriques J, Coimbra M, Catarino A, Lestinova T, Spitzova T, Volf P, Campino L, Charrel R, Maia C
Micro-organismes , 2019

Réponse des anticorps à Phlébotome pernicieux la salive chez les chats naturellement exposés aux phlébotomes est positivement associée à Leishmanie infection
Pereira A, Cristóvão JM, Vilhena H, Martins A, Cachola P, Henriques J, Coimbra M, Catarino A, Lestinova T, Spitzova T, Volf P, Campino L, Maia C
Parasites et vecteurs amp , 2019

Bactéries et protozoaires transmis par les tiques détectés chez des tiques prélevées sur des animaux domestiques et des animaux sauvages dans le centre et le sud du Portugal
Pereira A, Parreira R, Cotão AJ, Nunes M, Vieira ML, Azevedo F, Campino L, Maia C
Tiques et maladies transmises par les tiques, 2018

Typage moléculaire, traits de virulence et résistance aux antimicrobiens des staphylocoques du pied diabétique
Mottola C, Semedo-Lemsaddek T, Mendes JJ, Melo-Cristino J, Tavares L, Cavaco-Silva P, Oliveira M
Journal des sciences biomédicales, 2016

Régulation oestrogénique des transporteurs de bicarbonate de la famille SLC4 dans des cellules de Sertoli de rat
Bernardino RL, Martins AD, Jesus TT, Sá R, Sousa M, Alves MG, Oliveira PF
Mol Cell Biochem , 2015

Agents bactériens et protozoaires des maladies à transmission vectorielle canine dans le sang des chiens domestiques et errants du sud du Portugal
Maia C, Almeida B, Coimbra M, Fernandes MC, Cristóvão JM, Ramos C, Martins Â, Martinho F, Silva P, Neves N, Nunes M, Vieira ML, Cardoso L, Campino L
Parasites et vecteurs amp , 2015

Purification d'un vaccin antigrippal à base d'acide désoxyribonucléique à l'aide d'un monolithe d'agmatine
Bicho D, Caramelo-Nunes C, Sousa A, Sousa F, Queiroz JA, Tomaz CT
J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci , 2016


EtBr Alternatives

SERVA DNA Stain Clear G est une nouvelle version non cancérigène, beaucoup plus sensible et pratique de notre SERVA DNA Stain G. Il peut être utilisé à la place du bromure d'éthidium hautement cancérigène pour détecter l'acide nucléique dans les gels d'agarose.

SERVA DNA Stain Clear G émet une fluorescence verte lorsqu'il est lié à l'ADN ou à l'ARN. Il a deux pics d'excitation de fluorescence secondaires (environ 270 nm et 295 nm) et un pic d'excitation fort centré autour de 490 nm. L'émission de fluorescence est similaire à EtBr à ca. 530 nm lorsqu'il est lié à l'acide nucléique.
Les protocoles de pré-coulée et de post-coloration sont applicables.
1 ml de ce colorant est suffisant pour 17 – 25 L de gel d'agarose.

Information additionnelle

Informations de commande

AMRESCO – EZ-Vision™, remplacement sûr pour EtBr

EZ-VISION™ est un réactif fluorescent non mutagène qui produit une visualisation instantanée des bandes d'ADN lors de l'illumination UV des gels d'agarose (*). Les produits EZ-VISION™ sont fournis dans le tampon de chargement d'ADN 6X d'AMRESCO.
EZ-VISION™ Three contient 3 colorants de suivi qui migrent à 4 000 pb, 400 pb et 10 pb % Gel d'agarose. EZ-VISION™ forme un complexe étroit avec l'ADN de l'échantillon et migre avec lui pendant l'électrophorèse. Les bandes d'ADN peuvent être visualisées immédiatement après l'analyse en plaçant le gel sur un transilluminateur UV standard. La coloration et la décoloration post-analyse sont complètement éliminées.

EZ-VISION™ est non mutagène et élimine les considérations d'expédition et de manutention dangereuses. Il est idéal pour les applications nécessitant une visualisation rapide des bandes d'ADN et pour les environnements nécessitant une alternative sûre et non dangereuse au bromure d'éthidium.

(*) L'EZ-VISION™ n'est pas compatible avec le gel d'acrylamide ni pour la coloration d'ARN.


Bien que le bromure d'éthidium soit couramment utilisé pour colorer l'ADN dans les gels, le bromure d'éthidium a également été utilisé pour détecter des complexes protéine-ADN dans des tests de décalage de bande et pour observer des molécules d'ADN uniques pendant l'électrophorèse sur gel. La coloration de l'ADN simple brin ou de l'ARN est moins sensible, nécessitant souvent 10 fois plus d'acide nucléique pour une détection équivalente.

Nous proposons une solution aqueuse à 10 mg/mL de bromure d'éthidium, qui peut être utilisée telle quelle ou diluée à la concentration souhaitée.

Manipulez EtBr avec prudence
L'inconvénient majeur du bromure d'éthidium est qu'il est un puissant mutagène. La solution de bromure d'éthidium doit être manipulée avec une extrême prudence et décontaminée avant élimination.


Le colorant d'acide nucléique Diamond™ est une alternative sûre et économique au bromure d'éthidium

Dans cette étude, nous avons comparé les propriétés mutagènes du colorant acide nucléique Diamond&trade et du bromure d'éthidium à l'aide du test d'Ames, un test biologique permettant de déterminer la mutagénicité potentielle d'un composé. Nous avons constaté que le colorant acide nucléique Diamond&trade est significativement moins mutagène que le bromure d'éthidium aux concentrations généralement utilisées pour colorer les gels.

Introduction

Depuis les années 1960, les scientifiques ont utilisé l'électrophorèse sur gel pour séparer les acides nucléiques par taille, et le bromure d'éthidium a été utilisé pour colorer et visualiser les acides nucléiques après l'électrophorèse (1) . Nous avons déjà montré que le colorant acide nucléique Diamond&trade est un colorant sensible qui peut être utilisé pour visualiser un large éventail de concentrations et de tailles d'ADN et d'ARN post-électrophorèse avec le même équipement (2) . L'utilisation sûre des réactifs de laboratoire est extrêmement importante, et il y a un mouvement croissant pour réduire la quantité de réactifs toxiques utilisés quotidiennement dans le laboratoire.

Le bromure d'éthidium est un agent interchélateur aux propriétés mutagènes connues. Le colorant d'acide nucléique Diamond&trade, quant à lui, est un agent fluorescent qui se lie aux rainures de la ou des structures hélicoïdales des acides nucléiques. Dans cette étude, la mutagénicité (génotoxicité) du colorant acide nucléique Diamond&trade a été déterminée et comparée à celle du bromure d'éthidium à l'aide du test Ames MPF&trade, un test qui a été utilisé pour déterminer la mutagénicité des produits chimiques depuis le début des années 1970 et qui est encore largement utilisé. aujourd'hui.

Matériaux

Méthodes

Les tests de toxicité ont été effectués par Apredica (Watertown, MA), une division de recherche sous contrat de Cyprotex, en utilisant le test Ames MPF&trade (3) . Les stocks de composés (Diamond&trade Nucleic Dye et Ethidium Bromide) ont été fournis à Apredica, puis dilués à 1:25 dans du PBS, puis dilués en série à 1:10 sur 6 doses pour un dosage en triple dans le mini-Ames MPF&trade Assay. Le colorant acide nucléique Diamond&trade a nécessité une dilution initiale supplémentaire de 1:10 dans du PBS pour obtenir un stock soluble pour les tests.

Deux souches bactériennes ont été testées : Salmonelle typhimurium portant des mutations dans l'opéron pour la biosynthèse de l'histidine 1) souche TA98 (mutation par décalage du cadre de lecture) et 2) souche TA100 (substitution de paires de bases). Les souches ont été testées en l'absence et en présence d'extrait de foie de rat S9 pour l'activation métabolique, qui peut convertir certains produits chimiques en mutagènes. Les bactéries ont été incubées avec les composés dans des milieux avec un minimum d'histidine pendant 90 minutes (suffisant pour 2 doublements générationnels), puis transférées dans des milieux sans histidine et cultivées pendant 48 heures supplémentaires. Les révertants naturels ont été suivis sans composé (témoin véhicule seul), n=9. Conformément au test Ames MPF&trade, les bactéries ont été incubées en culture liquide en présence d'un indicateur de pH colorimétrique. Un changement de pH était indicatif de la croissance bactérienne et surveillé par spectrophotométrie.

La croissance en présence du composé a été comparée à un témoin contenant uniquement un véhicule. Deux écarts types au-dessus du témoin véhicule seul ont été définis comme référence. Les doses de composés qui ont donné une croissance significative au-dessus de la ligne de base (comme déterminé par P<0,01 par un test T unilatéral non apparié) ont été classées comme mutagènes (génotoxiques). Les doses de composés qui ont donné une croissance significative en dessous de la ligne de base (comme déterminé par P<0,01 par un test T unilatéral non apparié) ont été classées comme cytotoxiques (la croissance globale a été inhibée, la mutagénicité n'a donc pas pu être déterminée).

Résultats

Nous avons évalué la toxicité potentielle du colorant d'acide nucléique Diamond&trade à l'aide du test Ames MPF&trade et comparé les résultats à ceux du bromure d'éthidium, un colorant d'acide nucléique cancérigène et mutagène connu. Nous avons utilisé une série de dilution 1:10 pour englober les concentrations d'utilisation recommandées pour les deux colorants.

Le bromure d'éthidium est généralement disponible à un stock de 10 mg/ml et utilisé pour la coloration de gel à

0,5µg/ml. Les tests d'Ames ont montré qu'il était mutagène (3) . Il était cytotoxique (inhibait toute croissance de fond) aux doses testées les plus élevées et génotoxique dans la plage des concentrations d'utilisation typiques (figure 1).

Figure 1. Toxicité du bromure d'éthidium mesurée par le test Ames MPF™. Chaque dose de composé a été testée avec 2 souches bactériennes (TA98 et TA100) en l'absence et en présence d'extraits de foie de rat S9. Moyenne des échantillons en triple indiqué. Les doses comprises dans la plage d'utilisation typique sont indiquées (0,4 et 4µg/ml). Les doses de composé ont été comparées à la ligne de base du témoin de véhicule (n=9). Les doses montrant une croissance significative au-dessus (génotoxicité) ou au-dessous (cytotoxicité) de la ligne de base sont indiquées (comme déterminé par P<0,01 par un test T unilatéral non apparié).

Le colorant acide nucléique Diamond&trade est également fourni hautement concentré avec une dilution d'utilisation recommandée de 1:10 000. En tant que stock concentré, le colorant acide nucléique Diamond&trade était également cytotoxique, mais à la dilution d'utilisation recommandée, aucune toxicité n'a été détectée (Figure 2). Une certaine génotoxicité a été détectée à une dilution intermédiaire (1:1 000), mais seulement à 7 % du niveau mesuré pour le bromure d'éthidium.

Figure 2. Toxicité du colorant acide nucléique Diamond™ mesurée par le test Ames MPF™. Chaque dose de composé a été testée avec 2 souches bactériennes (TA98 et TA100) en l'absence et en présence d'extractions de foie de rat S9. Le colorant de stock a été fourni à 23,5X par rapport au stock commercial (Cat. # H1181), mais arrondi à 25X pour simplifier les rapports. Moyenne des échantillons en triple indiqué. La dose d'utilisation recommandée est indiquée (facteur de dilution de 0,0001). Les doses de composé ont été comparées à la ligne de base du témoin de véhicule (n=9). Les doses montrant une croissance significative au-dessus (génotoxicité) ou au-dessous (cytotoxicité) de la ligne de base sont indiquées (comme déterminé par P<0,01 par un test T unilatéral non apparié).

Conclusion

Le colorant acide nucléique Diamond&trade n'est pas génotoxique ou cytotoxique détectable à la dilution de 1:10 000 recommandée pour la coloration sur gel, comme déterminé par le test Ames MPF&trade. Ceci est différent du bromure d'éthidium, qui est génotoxique à des concentrations d'utilisation typiques (0,5 µg/ml). Les deux colorants sont cependant cytotoxiques à des concentrations de stock disponibles dans le commerce. Ces données indiquent que le colorant acide nucléique Diamond&trade est significativement moins toxique que le bromure d'éthidium dans les concentrations typiques utilisées pour colorer les gels.


Résumé

L'électrophorèse et la coloration de l'ADN sont une procédure courante dans les laboratoires de biochimie, mais l'utilisation du bromure d'éthidium (EB) pour la détection de l'ADN est préoccupante car l'EB est un mutagène et un cancérogène probable. Cinq colorants alternatifs ont été évalués pour la détection de l'ADN, la sécurité, le coût et la facilité d'utilisation : BlueView, bleu de méthylène, Carolina Blu, DAPI (4',6-diamidino-2-phénylindole dihydrochloride:hydrate) et SYBR Green I. BlueView, Le Carolina Blu et le bleu de méthylène ne sont pas suffisamment sensibles pour détecter les quantités de microgrammes d'ADN utilisées dans de nombreuses procédures. Cependant, le DAPI et le SYBR Green I sont de bonnes alternatives de coloration au bromure d'éthidium car ils ont une sensibilité similaire et sont tous deux faciles à utiliser. SYBR Green I est plus cher que EB ou DAPI, cependant, les données de sécurité limitées suggèrent que SYBR Green I est la teinture la plus sûre.


En quoi la coloration sur gel d'ADN SYBR Safe est-elle meilleure que la méthode de coloration conventionnelle au bromure d'éthidium ?

SYBR Coffre-fort est un colorant cyanine utilisé comme acide nucléique tache en biologie moléculaire. SYBR Coffre-fort lier à ADN. La résultante ADN-le complexe colorant absorbe la lumière bleue (&lambdamax = 509 nm) et émet une lumière verte (&lambdamax = 524 nm).

À côté de ci-dessus, comment le bromure d'éthidium ou le vert SYBR colorent-ils l'ADN ? Le bromure d'éthidium (EtBr) et SYBR Vert je sommes gel d'acide nucléique taches et couramment utilisé en combinaison avec un éclairage UV. EtBr induit préférentiellement des mutations de décalage du cadre de lecture mais uniquement en présence d'un système d'activation métabolique exogène, tandis que SYBR Vert je est un mutagène très faible qui induit des mutations de décalage du cadre de lecture.

A côté de cela, quel est le mécanisme de coloration de l'ADN avec les colorants EtBr ou SYBR Safe, pourquoi sont-ils considérés comme des mutagènes potentiels ?

Les SYBR Vert I et II taches (encore une fois, commercialisés par Molecular Probes) sont optimisés à des fins différentes. Parce que elles ou ils lier à ADN, elles ou ils sont encore considérés comme des mutagènes potentiels Et à cause de ça, elles ou ils doit être manipulé avec précaution.

Pourquoi les scientifiques utilisent-ils le bromure d'éthidium ?

Le bromure d'éthidium. Le bromure d'éthidium est une molécule communément utilisé pour visualiser l'ADN dans des expériences d'électrophorèse sur gel d'agarose. Quand cela est exposé à la lumière ultraviolette, le bromure d'éthidium fluorescent. Ainsi, ce produit chimique fournit à la fois un moyen de marquer les molécules d'ADN et un moyen de les visualiser.


Sommaire

Afin d'étudier les acides nucléiques, nous devons avoir un moyen de les séparer et de les identifier.

La technique de séparation la plus courante est l'électrophorèse sur gel. Les morceaux d'ADN se séparent sur un gel en fonction de leur taille.

L'ADN peut être visualisé sur un gel par autoradiographie, une procédure dans laquelle l'ADN a incorporé des nucléotides radioactifs.

L'ADN peut également être vu en utilisant la fluorescence, souvent avec un composé appelé bromure d'éthidium, qui brille en orange sous la lumière UV lorsqu'il est lié à l'ADN.